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技術|臨床豬病診斷和抗體檢測簡單實用的方法——快速檢測卡


在現代規?;B豬生產中,雖然采取了各種良好的飼養管理和防疫措施,但疾病仍時有發生,很多時候會造成嚴重損失。為降低疾病的發生,為疫苗免疫做好科學的指導,非常有必要了解豬體內的有效抗體水平,這就必須開展抗體水平監測。


目前對抗體水平檢測的方法很多,如ELISA檢測法、DOT-ELISA檢測法和間接血凝法等,這些檢測技術雖然具有微量、特異的優點,但對檢測條件、設備配備和人員操作的技術水平要求較高,而且檢測時間長,檢測程序繁瑣,檢測成本很高,不適合基層獸醫和養殖場使用。


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快速抗體檢測試紙基于膠體金免疫層析技術,其檢測結果的特異性及靈敏度大大提高,而且樣品不必預處理,也大大降低了實驗過程中的人為誤差和工作強度。

實際操作中只需要按照產品說明進行簡單的操作,不需要任何額外配備儀器設備,已廣泛應用在醫學檢驗和農牧業生產中,適用于不同的檢疫和診斷機構,更適合于基層獸醫及養殖場使用,為動物疫病的早期診斷和適時免疫提供了新的技術手段。


一、原理說明(以豬瘟為例)


豬瘟抗體快速檢測試紙采用酶聯免疫原理和膠體金層折技術制成,快速檢測豬血清中的豬瘟抗體,當血清加入加樣孔內,由于層析的原理,血清開始沿紙條移動擋遇上干燥的金標抗原,將其溶解,并帶著金標抗原繼續往上移動,至硝酸纖維素膜的檢測線。如果樣品中有豬瘟抗體存在時,會與玻璃纖維素膜上的金標豬瘟抗原和包被在檢測線上的豬瘟抗原,在檢測線(T)上形成一個夾心的免疫復合物,呈一條紫紅色線。樣品中的抗體越高,色線顏色越深,判定為陽性。


如果樣品中沒有豬瘟抗體,在檢測線(T)上沒有色帶出現,判定為陰性。樣品和金標抗原繼續往上移至質控線(C)時,此處的兔抗瘟抗體將會同金標豬瘟抗原結合,在質控線(C)上形成一條紫紅色線,證明本試紙有效。整個試驗僅需10-15分鐘。操作簡便,快速,靈敏度高,準確率達98%以上,直觀,結果容易判定??谔阋?、偽狂犬、藍耳病檢測原理同豬瘟。


豬瘟病毒抗體快速檢測卡9.jpg


二、豬病抗體快速檢測卡使用方法


【樣本要求】


1.本檢測卡僅適用于檢測豬血清/全血。


2. 血清:按常規方法抽取2-3ml血液置潔凈干燥的試管中,靜置約1小時待血液凝固后于4000轉/分鐘離心10 分鐘(也可將血液靜置約2小時,待血液凝固自然析出血清),分離血清。要求血清清亮,無溶血、無污染。血清樣本短期可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。


3. 全血:采集新鮮抗凝全血當天使用,未加抗凝劑的全血現采現用。


【試驗方法】


1.血清/全血加樣方式:撕開檢測卡鋁箔包裝袋,取出檢測卡,放于平整、潔凈的臺面上,使用袋內吸管取1滴血清或2滴全血緩慢滴加到加樣孔內,再滴加2滴稀釋液到加樣孔。


2. 室溫下放置,10-15 分鐘判斷結果,15 分鐘后的顯色結果無效。


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【結果判斷】


1.陰性:在觀察孔內,只有對照線區(C)出現一條紫紅色線。


2. 陽性:在觀察孔內,檢測線區(T)及對照線區(C)同時出現紫紅色線??贵w滴度越高,檢測線(T)顏色越深。


3. 無效:在觀察孔內,對照線區(C)不出現紫紅色線。


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【診斷參考】


1、  如果該豬未接種過豬瘟病毒疫苗:


A. 當被檢樣品檢測線 T 處無明顯色帶出現,該樣本中不含有豬瘟病毒抗體,如果種群健康,則表示沒有豬瘟病毒感染,應當及時進行豬瘟病毒疫苗接種。如果出現相應的急性癥狀,則不能排除有豬瘟病毒感染。


B. 當被檢樣品檢測線 T 處有明顯色帶出現,則該動物存在豬瘟病毒感染,或既往感染,應進一步驗證。


2、 如果該豬已接種過豬瘟病毒疫苗:


A. 當被檢樣品檢測線 T 條帶的色澤≥對照卡中 1:32 效價時,說明豬瘟病毒抗體的滴度較高,已達到抵御野毒攻擊的保護水平,同時說明感染野毒的可能性較小。


B. 當被檢樣品檢測線T 條帶的色澤<對照卡中 1:32 效價時,說明豬瘟病毒抗體效價未達到抵御豬瘟病毒野毒攻擊的*保護滴度,存在感染野毒的風險,建議進行疫苗補種。


3、檢測范圍


外調種豬須逐個檢測,育肥豬按10%-15%比例抽檢。


自繁種豬檢測,豬瘟效價應不低于1:32,抽檢比例為10%-20%。


仔豬出生首日-5日齡,測其母源抗體,首免后15-20天,二免后10-15天進行抗體檢測,檢測比例為3%-5%,豬瘟效價不能低于1:32。


4、注意事項


檢測卡從鋁箔袋取出后應盡快使用,受潮后檢測卡將失效。


檢測卡應在30℃以下保存,不可冷凍,保存有效期為24個月。


口蹄疫、偽狂犬、藍耳病抗體檢測卡使用方法同豬瘟。


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三、檢測卡在現代養豬保健中的作用


1、檢測卡可用于檢驗豬瘟疫苗的質量和確定免疫的最適劑量


如養豬場購買大批量的豬瘟疫苗放在自己場里的冰箱冷凍層內,每次*購買同一批號(一般以生產日期定批號)的豬瘟疫苗??梢詮闹腥〕鲆黄恳呙?,選擇不同日齡的乳豬、小豬、種豬若干頭,分別應用2頭份、3頭份、4頭份、5頭份豬瘟疫苗進行免疫接種,免疫15天后采血,用抗體免疫金標檢測卡測定抗體滴度。


如果各組都能產生抵抗豬病強毒攻擊的免疫抗體時,則可以從中選擇免疫頭份少,抗體滴度高作為本批號疫苗*免疫劑量。如果檢測的豬瘟抗體達不到強毒攻擊的*保護強度時,則應當檢查是否是疫苗本身問題,還是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環病毒)的干擾。這時可以采取更換該廠家不同批號的豬瘟疫苗或另選廠家的豬瘟疫苗,再按上述方法進行不同劑量免疫,來確定是否是該批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干擾,判定適宜的免疫劑量。


2、當母豬分娩時,用豬瘟抗體快速檢測卡檢測母豬的抗體水平


如果在試紙條上只出現1條色線(質控線C),說明母豬體內的豬瘟抗體滴度已低于抵抗豬瘟強毒攻擊的*保護強度,母豬應當及時進行豬瘟疫苗接種,同時乳豬應當及時采用超前免疫,以免發生豬瘟病。如果試紙條上出現2條色線,說明豬體內的豬瘟抗體滴度較高,可以抵抗豬瘟強毒的攻擊,就不需要進行超前免疫。因為仔豬可以通過初乳獲得母源抗體,這時仔豬可以按照正常的免疫程序進行預防注射。


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3、外購仔豬或者種豬時檢測抗體狀況和免疫情況


當從外地購進大批量的小豬或種豬時,飼養主自己無法了解購買的小豬是否進行過豬瘟疫苗免疫或免疫是否有效,應使用檢測卡。為了防止豬瘟病發生,選擇什么時間再進行豬瘟免疫最適宜時,則可以根據不同地區、不同日齡的豬,選擇有代表性的豬采血,應用豬瘟抗體免疫金標檢測卡進行快速檢測。通過檢測結果,可以了解整個豬群豬瘟抗體的狀況,以便決定是否及時開展免疫及選擇適宜的免疫劑量,這樣可以避免豬瘟病的發生。


4、在懷疑發生豬瘟病時,可以采集病豬血清(或血液)用豬瘟抗體快速檢測卡檢測


如果發生豬瘟病,豬體血液中沒有豬瘟抗體或抗體滴度很低。當然,發生豬瘟而耐過不死的豬,抗體滴度可能會很高。其他疾?。▊慰袢?、圓環、藍耳、口蹄疫)檢測道理同豬瘟病的檢測方法。


5、進行疫病監測時,可應用抗體免疫金標檢測卡進行快速檢測


如豬場發生豬瘟病時,常規的處理程序是全面隔離消毒和緊急預防注射。此時豬群特別是種豬場的豬群的抗體滴度差異很大,緊急預防注射疫苗后的抗體滴度水平又會出現明顯的差異。因此,還應當重新了解豬瘟抗體水平,以制定合理的免疫程序,確保豬場的科學保健。



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