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膠體金快速檢測技術在豬瘟凈化方面的應用


豬瘟(Classical swine fever CSF)是由豬瘟病毒引起的嚴重危害養豬業的重大傳染病,是世界動物衛生組織(OIE)規定的必須報告的疫病。該病以發病急、持續高熱、全身出血和白細胞減少為特征,發病率和死亡率高,豬是其*的易感宿主。


豬瘟對世界各國的養豬業都產生過嚴重的影響,例如97年荷蘭爆發的急性豬瘟導致政府撲殺生豬1200萬頭,直接經濟損失就超過20億美元。


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一、豬瘟病毒


豬瘟病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬成員,病毒形態呈圓形,有囊膜,直徑40~60nm,衣殼呈二十面體對稱,內含單股正鏈RNA基因組,病毒核酸長約12300個核苷酸。豬瘟病毒對環境的抵抗力不強,對干燥、紫外線和脂溶劑均敏感,但是排泄物和組織中的豬瘟病毒抵抗力很強,如糞便中的病毒能在20℃環境下存活2周,豬肉中的病毒能夠存活數月乃至一年。


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二、目前流行狀況


據中國獸藥監察所豬瘟參考實驗室介紹,我國雖無豬瘟大爆發,但是31個省市均有豬瘟散發和流行,造成的經濟損失依然很嚴重。在全面實施豬瘟強制免疫的壓力下,我國非典型、慢性、隱性豬瘟在逐漸增加。


另外,雖豬瘟疫苗免疫率超過95%以上,但豬瘟免疫合格率也并不像想象中樂觀。中國動物衛生與流行病學中心對2010-2014年全國149個豬場共計9534份血清的監測顯示,不同的豬群豬瘟抗體陽合格率從41.57%-67.43%。


豬群抗體合格率在不同地區、豬場、不同豬群之間差異明顯,離散度大。一個群體抗體合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆發。種母豬群要求合格率在95%以上;種公豬和后備種豬群要求達到*合格率。而有些豬場免疫后保護水平顯然不足以抵抗野毒感染。


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三、豬瘟凈化首先要控制傳染源


如要做到豬瘟凈化,首先要控制傳染源。但是,各種報告和報道中顯示,不僅病豬/病料中有豬瘟病毒,即便外觀健康的豬群也經??梢詸z測到豬瘟病毒。


另外,也有研究顯示,種公豬的精液也存在豬瘟病毒感染情況。即使是未發病的健康豬場,種公豬的精液也有4%的感染率;發病豬場公豬精液的感染率高達30%。


對于健康豬群帶毒的原因,臨床上豬瘟流行株具有強、中、低不同致病性毒株,是多種因素綜合影響的結果。而這種帶毒將會造成豬場豬瘟的惡性循環。比如通過種母豬、種公豬水平或垂直傳播,使整個群體都在擴散,先天感染的仔豬會形成免疫耐受。


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這種隱性帶毒沒有癥狀的特征,對豬瘟的控制產生了嚴重的影響,所以有些豬場豬瘟病毒一直清除不掉。由于豬瘟病毒主要損傷豬的淋巴器官,對淋巴器官的損傷是持續性的、不可恢復的,因此感染的豬再打疫苗也沒有作用。不清除病毒,通過免疫方法凈化豬瘟的效果是難以保證的。因此應當從源頭上將帶毒豬淘汰。


扁桃體是檢測慢性豬瘟一個最敏感最方便的組織之一,但是活體采扁桃體比較困難,所以很多豬場只有在發病時才檢測豬瘟抗原,平時只檢測豬瘟抗體。對于一般豬場尤其是中小型豬場而言,即使采扁桃體樣品檢測豬瘟抗原,也只能送到各檢測中心去檢測,因為現行的豬瘟抗原的檢測方法主要是熒光染色、各種PCR方法(比如熒光定量PCR、套式或普通PCR)等。這些法對人員、環境、設備等要求比較高,中小型的豬場通常不具備條件且豬瘟病毒感染率常常超過大型的養殖企業。


膠體金快速檢測試劑通過紙層析來完成抗原抗體的快速反應,操作簡單、快速,對人員、環境、設備等無要求,非常適合基層或現場進行檢測。人醫臨床或家庭常用的早早孕試紙條就是膠體金檢測試劑的一種。


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賽諾利康生物有限公司開發的基于膠體金平臺的豬瘟病毒抗體快速測試卡,操作簡單、快速,能夠幫助豬場在現場完場豬瘟病毒的檢測或篩查,為豬瘟凈化提供依據。


操作簡單:只需要三步即可完成,即采集血液分離血清;向膠體金測試卡上滴加血清,再滴加2滴稀釋液到加樣孔;靜止10-15分鐘觀察結果。


快速:10-15分鐘即可完成。


對人員無要求:任何人一看就會,不需要專業的學歷。


結果判斷:一目了然,易于判斷。


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四、定期評估豬瘟抗體水平并及時對免疫程序進行適當的優化


由于各養殖場的管理水平、 營養狀態、所用疫苗質量、免疫程序等的差異,導致豬瘟抗體水平參差不齊。另外,再加上多種微生物的混合感染,比如豬瘟可以與藍耳、偽狂犬、流行性腹瀉、副豬嗜血桿菌等病原發生二重、三重甚至多重感染。這種混合感染造成的免疫抑制嚴重,影響了豬瘟疫苗的免疫效果。


總的來說,定期評估豬瘟抗體效價水平的意義:


評估免疫效果:疫苗免疫后效果到底如何,用事實說話。一個群體抗體合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆發。而有些豬場免疫后保護水平顯然不足以抵抗野毒感染。曾有人在2013年評估不同品牌的豬瘟疫苗,發現抗體陽性率從27%-85%,可見疫苗的質量也是參差不齊的。根據豬瘟抗體的檢測結果查缺補漏,及時調整。


優化免疫程序:通常情況下,規模豬場商品豬首免在25-35日齡,二免在60-70日齡;種豬初免在25-35日齡,60-70日齡二免是比較合適的。但是具體免疫的時機,應該通過抗體監測、抗體的消長規律來具體確定并制定符合場內的免疫程序。


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豬瘟病毒抗體快速檢測卡


豬瘟抗體的檢測原則上以中和抗體為佳,但是中和抗體操作復雜,不利于推廣,因此現在常用總抗體的檢測代替中和抗體。目前市場上常用的是進口的豬瘟抗體ELISA試劑盒。


賽諾利康生物開發的豬瘟病毒抗體快速檢測卡,依然基于膠體金技術平臺,膠體金方法與ELISA方法相比:操作簡單,一學就會;檢測快速,15分鐘內出結果;檢測報告清晰易懂,不必高深的專業知識。膠體金檢測試紙特別適合現場、基層檢測使用。


五、結束語


用疫苗免疫進行豬瘟凈化前,首先要控制傳染源。通過豬瘟病毒抗體快速檢測卡或PCR等方法現場篩查陽性豬,必要時采用特異性更好的方法進行確認,根據確認結果決定是否淘汰陽性豬;


定期評估抗體水平,有助于及時優化、調整免疫程序,控制豬瘟感染。豬瘟抗體膠體金測試卡操作簡單、快速,非常適合現場、基層使用。


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